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熒光標記氧化型低密度脂蛋白制備工作如何進行?

更新時間:2024-08-19      點擊次數:644
  熒光標記氧化型低密度脂蛋白是血漿中的主要膽固醇運輸顆粒,其在某些條件下被氧化修飾后形成的Ox-LDL在動脈粥樣硬化等心血管疾病的發生發展中起著重要作用。為了研究LDL在病理和生理過程中的作用,科學家們開發了多種標記方法,以便在細胞和分子層面進行追蹤。
  首先,LDL的提取是制備的第一步。從人血漿中分離出來的LDL通過一系列的離心和沉淀步驟得到純化。得到的LDL需要在含10μMCuSO4的PBS溶液中進行氧化反應。銅離子作為氧化催化劑,推動脂質過氧化反應的進行。此過程中,LDL中的多不飽和脂肪酸(PUFAs)被氧化,形成一系列復雜的氧化產物,包括丙二醛(MDA)和4-羥烯酸(4-HNE)。這些物質進一步與ApoB-100結合,形成希夫氏堿,從而改變LDL的結構和功能特性。
  接下來是進行熒光標記。常用的熒光標記物為DiI,這種標記物可以與LDL顆粒結合,不影響其生化特性。將DiI與已氧化的LDL孵育,通過疏水作用使DiI嵌入LDL顆粒的脂質核心中。經過適當的孵育時間后,未結合的DiI通過透析或凝膠過濾去除,最終獲得熒光標記的氧化型低密度脂蛋白,即DiI-Ox-LDL。
  最后是熒光標記氧化型低密度脂蛋白的注意事項與應用領域。在整個過程中,需要嚴格控制實驗條件,如溫度、pH值和反應時間,以確保熒光探針的有效結合并且保持Ox-LDL的生物活性。制備后的DiI-Ox-LDL通常在4℃避光保存,且不可凍結。該標記脂蛋白廣泛用于研究脂質代謝、受體介導的內吞作用以及動脈粥樣硬化機制。

熒光標記氧化型低密度脂蛋白

 

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